Der erste Reinigungsschritt wurde mit dem Tirzepatid-Rohprodukt durchgeführt. Das Rohmaterial wies eine Reinheit von 20 % auf. Die Methodenentwicklung erfolgte im analytischen Maßstab durch Screening des gesamten YMC-Triart Prep-Setups. Die besten Ergebnisse hinsichtlich Trenngüte sowie Zielreinheit und Ausbeute wurden mit YMC-Triart Prep Bio200 C8 erzielt – einer C8-modifizierten stationären Phase mit geringerer Hydrophobizität und optimierter Porenstruktur für die Aufreinigung von Rohpeptiden. Während der Methodenentwicklung wurden chromatographische Parameter wie die Zusammensetzung der mobilen Phase und der organische Modifikator angepasst, um das Gesamtergebnis der Trennung zu verbessern. Anschließend wurde die Beladung erhöht, um die Produktivität der Reinigung zu steigern. Dieser chromatographische Reinigungsschritt mit YMC-Triart Prep Bio200 C8 führt zu einer deutlichen Verbesserung des Reinheitsgrades von Tirzepatid.

Der zweite chromatographische Schritt in diesem Aufeinigungsprozess war ein Polishing-schritt mittels RP (Reversed Phase). Dieser Schritt wurde mit YMC-Triart Prep C4-S durchgeführt, da diese Phase im Screening der stationären Phasen in Kombination mit der Anpassung der Methodenparameter die besten Ergebnisse lieferte. Die Aufreinigung erfolgte bei einem pH-Wert von 8,0, was zu hervorragenden Trennungsergebnissen führte. Dies ist dank der innovativen Hybrid-Silicabasis der YMC-Triart Prep stationären Phasen möglich. Die C4-Modifikation scheint die ideale Modifikation für die Polishing-Reinigung von Tirzepatid und auch anderen GLP-1-Peptiden zu sein, da sie die optimale Hydrophobizität für diese anspruchsvollen Peptide bietet.