Wer kennt das nicht?

Plötzlich sind die chromatographischen Ergebnisse verändert. Beispielsweise treten Peak-Splitting oder -Tailing auf. Vielleicht sind die Retentionszeiten verschoben oder auch gar keine Peaks detektiert.

Dann ist es an der Zeit, die Ursache der Anomalie zu finden und zu beheben. Da das endgültige Chromatogramm von verschiedenen Faktoren beeinflusst wird, sollten alle möglichen Komponenten und Variablen systematisch untersucht werden.

Eine methodische und zielgerichtete Überprüfung der folgenden Parameter ist angebracht; Jedes Verfahren wird später in diesem Dokument ausführlicher beschrieben:

Ablagerungen auf der stationären Phase sind ein häufiger Grund für eine Beeinträchtigung der Säulenperformance. Dies äußert sich vor allem durch

• einen erhöhten Rückdruck,
• verschobene Retentionszeiten oder
• deformierte Peaks.

Um Ablagerungen zu verhindern, werden der Einsatz von Vorsäulen und eine entsprechende Probenvorbereitung wie beispielsweise Filtration empfohlen.
Sowohl zur Vorbeugung als auch dann, wenn es bereits zu einer Adsorption von Material auf der stationären Phase gekommen ist, sind Spülschritte eine effektive Maßnahme zur Regeneration der Säule. Das Spülen sollte immer gegen die Flussrichtung durchgeführt werden, da sich die Verunreinigung meist noch am Säuleneingang befindet und so leichter herausgespült werden kann. Als ausreichende Spülmenge sind mindestens 20 Säulenvolumen mit einem geeigneten Lösungsmittel empfehlenswert.

Bei der Auswahl der Lösungsmittel sollten die Eigenschaften der Verunreinigung sowie die Beständigkeit der Säule beachtet werden. In folgender Übersicht sind geeignete Lösungsmittel in Abhängigkeit von verschiedenartigen Verunreinigungen aufgeführt. Die Effizienz der Reinigung kann durch erhöhte Temperatur gesteigert werden.

Je nach eingesetztem Lösungsmittel und unter Berücksichtigung der Beständigkeit der stationären Phase sind 40 °C – 90 °C hierfür einsetzbar. Weitere Empfehlungen können auch den Anweisungen der Säulenhersteller entnommen werden, zum Beispiel den Care and Use Instructions.

Generell gilt:

• Regelmäßig System, Säule, Injektor spülen
• Verschleißteile wie Filter, Fritten, Dichtungen regelmäßig wechseln

um Kontamination zu vermeiden.

Zudem kann das Führen eines Säulenlogbuches die Fehlersuche stark erleichtern. Wir empfehlen neben der Identität der verwendeten Säule, Anzahl der Injektionen und dem resultierenden Rückdruck auch die verwendeten Analyten und Methoden aufzuführen und regelmäßig durch eine Testmethode die Qualität der Trennsäule an den erhaltenen Ergebnissen zu bewerten.
Es sollten auch Notizen aufgeführt werden, die den Wechsel der Eluenten, Fehler im System oder andere Auffälligkeiten hervorheben. So kann nicht nur eine möglicherweise Tage oder Wochen andauernde Fehlersuche in wenigen Minuten abgeschlossen sein, sondern auch der Produktivitätsgewinn nach einer Optimierung Ihrer Methodenparameter verfolgt werden.