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Leitfaden zu analytischen HPLC- und UHPLC-Säulen
Was ist HPLC-Chromatographie?
Die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) ist eine weit verbreitete analytische Technik zur Trennung, Identifizierung und Quantifizierung von Komponenten in Flüssigkeitsgemischen. Dabei wird eine Flüssigkeitsprobe durch eine mit stationärer Phase gefüllte Säule geleitet, während eine mobile Phase (Lösungsmittel) durch das System fließt. Die Wechselwirkung der Bestandteile mit der stationären Phase führt zu ihrer Trennung. HPLC wird in Branchen wie Pharmazie, Lebensmittelsicherheit und Umweltanalytik für ihre Präzision und hohe Auflösung geschätzt.
Zu den Hauptkomponenten eines HPLC-Systems gehören eine Pumpe zur Förderung der mobilen Phase, ein Autosampler zur Injektion der Probe, eine stationäre Phasensäule zur Trennung der Verbindungen und ein Detektor zur Messung der getrennten Komponenten. Weitere wichtige Teile sind Schläuche und Anschlüsse, die den reibungslosen Fluss der mobilen Phase durch das System gewährleisten.
Was ist UHPLC-Chromatographie?
Die Ultra-Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (UHPLC) ist eine Weiterentwicklung der HPLC und bietet noch schnellere und präzisere Trennungen. Sie arbeitet mit höheren Drücken und kleineren Partikelgrößen (<2 Mikrometer), was eine höhere Auflösung und Geschwindigkeit ermöglicht. UHPLC eignet sich besonders für Hochdurchsatzumgebungen wie pharmazeutische Entwicklungen und Proteomik, wo Effizienz und scharfe Peak-Trennung entscheidend sind.
Unterschiede zwischen HPLC und UHPLC
Der Hauptunterschied zwischen HPLC und UHPLC liegt in den Betriebsdrücken und Partikelgrößen, die in den Säulen verwendet werden. HPLC verwendet Partikelgrößen von 3-5 Mikrometer und arbeitet bei Drücken bis zu 6.000 psi, während UHPLC sub-2 Mikrometer Partikel und Drücke bis zu 15.000 psi nutzt. Dies ermöglicht UHPLC schnellere und genauere Analysen, während HPLC für Routineaufgaben bevorzugt wird.
Arten von HPLC- und UHPLC-Säulen
Umkehrphasen-Säulen (Reversed Phase Säulen): YMC RP-Säulen trennen unpolare Verbindungen effektiv.
BioLC-Säulen:Optimiert für Biomoleküle wie Proteine und Peptide, mit bioinertem Design.
Ionen-Austausch-Säulen (IEX): Ideal für die Trennung geladener Moleküle.
SEC-Säulen: Perfekt für die Trennung nach Molekülgröße.
HIC-Säulen: Eignen sich für die Trennung nach Hydrophobizität.
Weitere HPLC- und UHPLC-Säulen
HILIC-Säulen: Für hochpolare Verbindungen.
Normalphasen-Säulen: Trennung polarer Verbindungen mit normaler Chromatographie.
Chirale Säulen: Speziell für die Enantiomerentrennung.
Mikro-/Nano-LC-Säulen: Für Analysen mit hoher Empfindlichkeit.
SFC-Säulen: Für überkritische Fluidchromatographie und chirale Trennungen.
Semi-Präparative Säulen (YMC Actus): Entwickelt für größere Probenmengen.
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